జన్యు అధ్యయనాలు నిర్వహించే ప్రక్రియలో, మేము తరచుగా తగినంత RNA నమూనాలను ఎదుర్కొంటాము, ఉదాహరణకు, చిన్న శరీర నిర్మాణ సంబంధమైన నోటి కణితులు, సింగిల్-సెల్ నమూనాలు మరియు మానవ కణాలలో చాలా తక్కువ స్థాయిలో లిప్యంతరీకరించబడిన నిర్దిష్ట జన్యు ఉత్పరివర్తనాల నమూనాలను అధ్యయనం చేయడం కోసం.వాస్తవానికి, COVID-19 పరీక్ష కోసం, శుభ్రముపరచు సరైన స్థలంలో లేకుంటే లేదా నమూనా సమయంలో తగినంత సమయం లేకుంటే, నమూనా పరిమాణం చాలా తక్కువగా ఉంటుంది, అందుకే ఆరోగ్య మరియు కుటుంబ నియంత్రణ కమిషన్ రెండు రోజుల క్రితం వచ్చింది మరియు పరీక్షలో ఉత్తీర్ణత సాధించారు మరియు న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ నమూనా ఆరు నమూనాలను తీసుకోకపోతే, మీరు దానిని నివేదించవచ్చు.
రియాజెంట్ యొక్క సున్నితత్వం ముఖ్యం ఎందుకంటే మనకు ఈ సమస్య లేదా ఆ సమస్య ఉంది, కాబట్టి RT-PCR యొక్క సున్నితత్వాన్ని మెరుగుపరచడానికి మనం ఏమి చేయవచ్చు?
మేము సాధ్యమైన పరిష్కారాలను చర్చించే ముందు, మేము ఇప్పుడే పేర్కొన్న పరిస్థితితో రెండు పెద్ద సమస్యలను ప్రస్తావిద్దాము.
అన్నింటిలో మొదటిది, మా నమూనాలో కొన్ని సెల్ జనాభా మాత్రమే ఉన్నప్పుడు మేము RNA నష్టం గురించి ఆందోళన చెందుతాము.కాలమ్ పద్ధతి లేదా న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ అవపాతం పద్ధతి వంటి సాంప్రదాయ విభజన మరియు శుభ్రపరిచే పద్ధతులను ఉపయోగిస్తే, కొన్ని నమూనాలు కోల్పోయే అవకాశం ఎక్కువగా ఉంటుంది.tRNA వంటి క్యారియర్ మాలిక్యూల్‌ను జోడించడం ఒక పరిష్కారం, కానీ అప్పుడు కూడా, మా పునరుద్ధరణ ప్రయోగం సరేనని హామీ లేదు.
కాబట్టి మంచి మార్గం ఏమిటి?కల్చర్డ్ సెల్స్ లేదా మైక్రోఅనాటమికల్ శాంపిల్స్ కోసం డైరెక్ట్ లైసిస్ ఉపయోగించడం మంచి ఎంపిక.
5 నిమిషాలపాటు కణాలను విభజించి, RNAను ద్రావణంలోకి విడుదల చేసి, ఆపై 2 నిమిషాల పాటు ప్రతిచర్యను ఆపివేయడం, ఆపై లైసేట్‌ను నేరుగా రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ రియాక్షన్‌కు జోడించడం, తద్వారా RNA కోల్పోకుండా, చివరకు ఫలితంగా cDNAని ఉంచడం. నిజ-సమయ ప్రతిచర్యలోకి.
పరిమిత ప్రారంభ స్థానం లేదా తక్కువ మొత్తంలో లక్ష్య జన్యు వ్యక్తీకరణ కారణంగా, మేము అన్ని RNAలను రీసైకిల్ చేయగలము మరియు మంచి నిజ-సమయ సిగ్నల్‌ను పొందడానికి తగినంత టెంప్లేట్‌లను అందించకపోతే?
ఈ సందర్భంలో, ప్రీ-యాంప్లిఫికేషన్ దశ చాలా ఉపయోగకరంగా ఉంటుంది.
రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ తర్వాత సున్నితత్వాన్ని పెంచడానికి క్రింది పథకం ఉంది.ప్రారంభించడానికి ముందు, ప్రీ-యాంప్లిఫికేషన్ కోసం ఈ లక్ష్యాల కోసం నిర్దిష్ట ప్రైమర్‌లను రూపొందించడానికి, మనకు ఆసక్తి ఉన్న లక్ష్యాలను దిగువకు అడగాలి.
గరిష్టంగా 100 జతల ప్రైమర్‌లతో మిశ్రమ ప్రైమర్‌ను సృష్టించడం ద్వారా మరియు 10 నుండి 14 సార్లు ప్రతిచర్య చక్రాన్ని సృష్టించడం ద్వారా దీనిని సాధించవచ్చు.కాబట్టి, ఈ అవసరం కోసం ప్రత్యేకంగా రూపొందించబడిన ఒక మాస్టర్ మిక్స్ పొందిన cDNAని ప్రీ-యాంప్లిఫై చేయడానికి అవసరం.
చక్రాల సంఖ్యను 10 మరియు 14 మధ్య సెట్ చేయడానికి కారణం ఏమిటంటే, ఈ పరిమిత సంఖ్యలో చక్రాలు వివిధ లక్ష్యాల మధ్య యాదృచ్ఛికతను నిర్ధారిస్తాయి, ఇది పరిమాణాత్మక పరమాణు సమాచారం అవసరమైన పరిశోధకులకు కీలకం.
ప్రీ-యాంప్లిఫికేషన్ తర్వాత, మేము పెద్ద మొత్తంలో cDNAని పొందవచ్చు, తద్వారా బ్యాక్-ఎండ్‌లో డిటెక్షన్ సెన్సిటివిటీ బాగా మెరుగుపడుతుంది మరియు మేము నమూనాను పలుచన చేయవచ్చు మరియు సాధ్యమయ్యే యాదృచ్ఛిక లోపాలను తొలగించడానికి బహుళ నిజ-సమయ PCR ప్రతిచర్యలను కూడా చేయవచ్చు.
పోస్ట్ సమయం: ఏప్రిల్-11-2023